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熒光定量PCR試劑盒

產品簡介

蛋白膽固(LDL-C)ELISA試劑盒SP-A 肺表面活性蛋白A20 ul

低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒SPA-1/SIPA-1 信號感應增殖相關蛋白1100 ul

的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒SPAG5/map126/Astrin 相關抗原5100 ul

蛋白酸酶(PP)ELISA試劑

更新時間:2021-03-15
訪問次數:1177
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 熒光定量PCR試劑盒

 規格

 50T

 貨號

 LZP7924

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
L-酪氨酸甲酯TRADD Antibody米諾地爾

L-半胱氨酸酯鹽酸鹽LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb二酸單甲酯鹽

L-氨酸酯鹽酸鹽GATA-4 (D3A3M) Rabbit mAb2-羥基嘧啶鹽酸鹽

甘氨酸酯鹽酸鹽DR5 Antibody2-溴-4'-(三氟甲基)酮

L-蛋氨酸酯鹽酸鹽;L-甲硫氨酸酯鹽酸鹽FLCN (D14G9) Rabbit mAb二氟酸酯

L-酪氨酸酯鹽酸鹽p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb2-硝基三氟甲

L-天冬氨酸-β-芐酯/L-天冬氨酸-芐酯p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb1,2-二氫-2-異丁氧基喹啉-1-甲酸異丁酯

L-谷氨酸-γ-芐酯MyD88 Antibody甲氧基酸甲酯

L-氨酸芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb2-巰基煙酸

L-脯氨酸芐酯鹽酸鹽β-Actin (8H10D10) Mouse mAb甲基-5-羥甲基咪唑鹽酸鹽

L-精氨酸-L-谷氨酸鹽TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-羥甲基噻唑

L-精氨酸-α-酮戊二酸鹽(2:1)GRB10 Antibody(二甲氨基)縮二甲

S-酰半胱氨酸鹽酸Phospho-SHP-2 (Tyr580) Antibody(3AR,4R,5R,6AS)-基六氫-2-氧代-2H-環戊并[B]呋喃-5-基 [1,1'-聯]-甲酸酯

O-叔丁基-L-蘇氨酸甲酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb2,二氨基-5-溴吡啶

L-氨酸異酯鹽酸鹽ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb甲基-2-并噻唑啉酮腙鹽酸鹽水合物

L-精氨酸叔丁酯TNF-α Antibody-硝

L-天冬酰甲酯鹽酸鹽JNK1 (2C6) Mouse mAb2-酸

L-天冬氨酸二叔丁基酯鹽酸鹽TGF-β (56E4) Rabbit mAb硫代嗎啉-1,1-二氧化物

低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒TPA/PLAT  組織型纖溶酶原激活劑100 ul

低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)ELISA試劑盒SUZ12/CHET9  胚胎干細胞抑制蛋白Suz12100 ul

低密度脂蛋白膽固(LDL-C)ELISA試劑盒SP-A   肺表面活性蛋白A20 ul

低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒SPA-1/SIPA-1  信號感應增殖相關蛋白1100 ul

的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒SPAG5/map126/Astrin  相關抗原5100 ul

蛋白酸酶(PP)ELISA試劑盒SPARC  富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白100 ul

蛋白聚糖4(PRG4)ELISA試劑盒SP-B  肺表面活性蛋白B20 ul

蛋白激酶G(PKG)ELISA試劑盒SP-D  肺表面活性蛋白D100 ul

蛋白激酶C(PKC)ELISA試劑盒Spectrin-Alpha  血影蛋白/收縮蛋白100 ul
熒光定量PCR試劑盒β-乳球蛋白抗體Myricetin中文名:楊梅素別名:分子式:C15H10O8

磷酸化β 連環素蛋白抗體Isorhamnetin中文名:異鼠李素別名:Quercetin 3'-methyl ether分子式:C16H12O7

丁酰膽堿酯酶單克隆抗體7,4'-Di-O-methylapigenin 5-O-glucoside中文名:別名:分子式:C23H24O10

BADH2抗體(稻)Chrysoeriol中文名:柯伊利素別名:金圣草黃素分子式:C16H12O6

β-酪蛋白抗體Lethedoside A中文名:別名:5-Hydroxy-3',4',7-trimethoxyflavone 5-O-glucoside分子式:C24H26O11
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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