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即用型PCR試劑盒(染料法)

產品簡介

氫酶1抗體Glutathione中文名:谷胱甘肽別名:分子式:C10H17N3O6S

ADP核糖基化樣因子ARL3抗體Melatonin中文名:褪黑素別名:分子式:C13H16N2O2

內收蛋白a1抗體Dehydroevodiamine hydrochloride中文名:去氫吳茱萸堿鹽酸

更新時間:2021-03-15
訪問次數:1104
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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 即用型PCR試劑盒(染料法)

 規格

 50T

 貨號

 LZP7882

組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
二甲氨基甲酸(>98.0%(HPLC)(T))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb2-氧代環戊基酸酯

5-(甲氧羰基基)-10,15,2-三基卟吩(>90.0%(HPLC))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb5-硝基吲哚-2-酮

2-萘甲酸(>98.0%(GC)(T))Basic FGF (19A9) Rabbit mAb2-噻吩

2-萘甲酰(>98.0%(GC)(T))EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb2-氟-溴-5-氨基吡啶

甲酸(>99.0%(GC)(T))PKM2 Antibody2-氨基腺嘌呤核苷

聯基-羧酸(>98.0%(T))E-Cadherin (24E10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2,4,5-三氟

基甲酰(>98.0%(GC)(T))SynGAP Antibody氨基-5-氟吡啶

二甲基氨基肉桂(>98.0%(T))Yes Antibody2-氟三氟甲氧基

2,萘二羧酸酐(>95.0%(GC)(T))eNOS (D9A5L) Rabbit mAb-2-氟

N-(叔丁氧羰基)-1,2-二氨基烷(>97.0%(GC))Androgen Receptor Antibody2--氟

[(叔丁氧羰氨基)甲基]吡啶-2-羧酸(>96.0%(HPLC)(T))CDK9 (C12F7) Rabbit mAb (PE Conjuga)5,6-二甲氧基茚酮

(鋅卟啉)(約5μmol/L的二溶液) Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb肉桂基

(鋅卟啉)(約5μmol/L的二溶液)Phospho-IRS-1 (Ser612) (C15H5) Rabbit mAb溴聯

五亞甲基雙[(10,15,20-三卟吩-5-基)甲酸]二鋅(Ⅱ)(>97.0%(HPLC))Pyruva Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAb6-溴吡啶-2-羧酸酯

全氟三丁(>60.0%(GC))Pyruva Dehydrogenase (C54G1) Rabbit mAbN,N,N',N'-四甲基-S-(1-氧代-2-吡啶基)硫脲六氟酸鹽

2,4,6-三(十五氟庚基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))GPX1 Antibody二甲氨基酮

2,4,6-三(五氟基)-1,3,5-三(>95.0%(GC))AMACR (2A10) Mouse mAb5-氨基-1H-咪唑-酰

2,4,6-三(七氟基)-1,3,5-三(>98.0%(GC))AP-2α Antibody2-氧基酸

L氨酸解氨酶(PAL)ELISA試劑盒phospho-PKC delta (Thr505)  酸化蛋白激酶C亞性D型100 ul

HSP90(IgM)ELISA試劑盒phospho-PKC delta (Tyr311)  酸化蛋白激酶C亞性D型20 ul

HSP90(IgG)ELISA試劑盒PLAU/uPA  尿激酶型纖溶酶原激活因子100 ul

HSP72(IgM)ELISA試劑盒PLAUR  尿激酶型纖溶酶原激活因子受體100 ul

HSP72(IgG)ELISA試劑盒PLG  纖維蛋白溶酶原100 ul

HSP60(IgM)ELISA試劑盒Plexin A1  神經叢蛋白A1100 ul

HSP60(IgG)ELISA試劑盒Plexin A2  神經叢蛋白A2100 ul

HSP27(IgG)ELISA kiPlexin B1  神經叢蛋白B11 Kit

HSP27 IgM ELISA試劑盒Plectin  網蛋白100 ul
即用型PCR試劑盒(染料法)ASTE1蛋白抗體Tetrahydropalmatine中文名:延胡索乙素別名:(+)-Tetrahydropalmatine; 右旋四氫巴馬汀分子式:C21H254

錨蛋白重復結構域蛋白17抗體L-Carnitine中文名:左旋肉堿別名:分子式:C7H153

胞質乙醛脫氫酶1抗體Glutathione中文名:谷胱甘肽別名:分子式:C10H17N3O6S

ADP核糖基化樣因子ARL3抗體Melatonin中文名:褪黑素別名:分子式:C13H16N2O2

內收蛋白a1抗體Dehydroevodiamine hydrochloride中文名:去氫吳茱萸堿鹽酸鹽別名:分子式:C19H16N3O
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

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