大鼠ELISA試劑盒的樣品類型(SAMPLE TYPES)上標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。取材前須有產品說明書。收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70℃可保存6個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。
大鼠ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被活性氧簇(ROS)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活性氧簇(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
大鼠ELISA試劑盒樣品的收集、處理及保存方法:
1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。