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細胞凋亡陽性對照試劑盒操作程序

更新時間:2023-02-16點擊次數:416

細胞凋亡陽性對照試劑盒操作程序:


注意:最重要的是及時固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。


1.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。


2.細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養,條件為37℃和5%的CO2,所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。


3.培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。


4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。


5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。


6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。


7.預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體,不洗。


8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節)。


9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。


10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗


11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。


12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。


13.滴加化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。


14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。


15.必要時蘇木素復染,充分水洗。


16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。

本試劑盒含有兩種不同的細胞凋亡誘導試劑,試劑A和試劑B。細胞凋亡誘導試劑A(Apopida)和試劑B(Apobid)分別可以誘導Hela、HEK293、CHO、COS等常見細胞的細胞凋亡。


由于細胞凋亡的誘導具有細胞特異性,細胞凋亡的機制也具有一定的細胞特異性,盡管細胞凋亡誘導試劑A和試劑B可以誘導常見的一些細胞的細胞凋亡,但是我們無法保證這兩種試劑可以誘導任何一種細胞發生凋亡。細胞凋亡誘導試劑A和試劑B相互補充,可以誘導更多種類的細胞產生凋亡。本試劑盒至少可用于檢測200個樣品。

高密度聚乙烯Polyethylene, High Density9002-88-4

L-焦性麩質酸;L-焦性膠氨酸;L-2-吡咯烷酮-5-羧酸L-PyroglutaMic acid;L-GlutiMinic acid;GlutiMic acid;GlutaMic acid lactaM;α- AMinoglutaric acid lactaM;L-5-Oxo-2-pyrrolidine carboxylic acid;(S)-(-)-2-Pyrrolidone-5-carboxylic acid98-79-3

L-異赤絲藻氨基酸L-Threonine;L-β-Hydroxy-2-aMinobutyric acid;(2S,3R)-2-AMino-3-hydroxybutyric acid;(2S,3R)-(-)-Threonine72-19-5

L-甲狀腺素鈉;L-甲狀腺胺鈉;3,5,3′,5′-四碘甲狀腺-L-原氨L-Thyroxine sodiuMsalt;3,3′,5,5′-Tetraiodo-L-thyronine sodiuM salt pentahydrate;SodiuM levothyroxine;Levothyroxine sodiuM;Eltroxin;Thyroxevan;25416-65-3

L-甲狀腺素;3,5,3′,5′-四碘-L-甲狀腺原氨酸;3-[4-(4-羥基-3,5-二碘苯氧基)-3,5-二碘苯基]-LL-Thyroxine;3-[4-(4-Hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine;β-[(3,5-Diiodo-4-hydroxyphenoxy)-3,5-diiodophenyl]-L-alanine51-49-0

;L-β-對羥苯基-α-氨基丙酸;L-干酪氨基酸L-Tyrosine;(S)-2-AMino-3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid;3-(4-Hydroxyphenyl)-L-alanine;L-α-AMino-β-p-hydroxyphenylpropionic acid;L-α-AMino- p-hydroxyhydrocinnaMic acid60-18-4

淋巴細胞分離液LyMphocyte separation Media;

麥康凱瓊脂;麥康克瓊脂Mac Conkey agar;

氟化鎂MagnesiuM fluoride;Afluon;Sellaite7783-40-6

MagnesiuM Hydroxide (AS);Marinco H1309-42-8

MagnesiuM Stearate (AS);DoloMol577-04-0

MagnesiuM trisilicate;MagnesiuM silicate;MagnesiuM Mesotrisillicate14987-04-3

蘋果酸Malic Acid;4455-77-0

丙二酰胺MalonaMide;PropanediaMide;108-13-4

丙二腈 99%Malonic acid141-82-2

丙二腈;氰化亞甲基;二氰甲烷;氰基乙腈;縮蘋果腈Malonitrile;Methylene cyanide;DicyanoMethane;CyanoacetonitrileMandelic Acid (AS);α-Hydroxyphenylacetic acid;Phenylhydroxyacetic acid;Phenylglycolic acid;α-Hydroxybenzeneacetic acid;dl-Mandelic acid90-64-2

Manganese Chloride (AS)7773/1/5




TEL:021-61210612

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